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7472023-12-05
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细胞培养中所用的培养箱一般称为CO2培养箱,它的气体环境是95%的空气和5%的CO2。
CO2既是细胞代谢产物,也是细胞所需成分,它主要与维持培养液的pH有直接关系。动物细胞多数需要微碱性环境,pH为7.2~7.4,以不超出6.8~7.6为宜。在细胞培养过程中,随着CO2释放量的增多,培养基会变酸,因此常加入NaHCO3(与CO2溶于水后所形成的H2CO3构成一个缓冲对)来调节pH.NaHCO3具有释放CO2的倾向,加入CO2可以抑制这个反应的进行。
培养箱中CO2浓度应与培养液中NaHCO3浓度相平衡,如果培养箱中CO2浓度设定在5%,培养液中NaHCO3的加入量应为1.97g/L;如果CO2浓度维持在10%,则NaHCO3的加入量应为3.95g/L.
细胞培养细胞培养技术也叫细胞克隆技术,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术,还是其中之一的生物克隆技术来说,细胞培养都是一个必不可少的过程,细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养,既包括微生物细胞的培养,细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞,这是克隆技术必不可少的环节,而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来,所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术
原代培养和传代培养的区别:原代培养的字面意思即第1次培养,但实际上,通常把第1代至第10代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。传代培养是第10代-第50代培养,这个时候是细胞株。
原代培养就是提取的细胞体外第一次培养,当原代培养成功以后,随着培养时间的延长和细胞不断分裂,一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制,生长速度减慢甚至停止,另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。
答:支原体污染.培养瓶瓶底不干净.培养液pH值过碱(NaHCO3分解).消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当.细胞老化(如传代前细胞已汇合导致失去贴附性).接种细胞起始浓度太低或太高.建议解决方法:缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度.分离培养物,检测支原体.清洁支架和培养箱.如发现支原体污染,丢弃培养物.注意刷洗,或换用一次性塑料培养瓶.使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2(将培养液敞口放入培养箱也可).重新配置消化液或培养液.启用新的保种细胞.调节最佳接种细胞浓度.南昌中洪博元技术部
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